PCR, Ko te tauhohenga mekameka polymerase, e pa ana ki te taapiri o te dNTP, Mg2+, nga mea elongation me nga mea whakarei ake ki te punaha i raro i te catalysis o te DNA polymerase, ma te whakamahi i te DNA matua hei tauira me nga tohu tuatahi hei timatanga mo te toronga , Na roto i nga hikoinga o te denaturation, annealing, toronga, aha atu, ka taea e te tukanga o in vitro te whakahoki i te whenu kotiro DNA hei taapiri ki te tauira whenu matua DNA ka taea te whakakaha tere me te whakakaha ake i nga DNA whainga in vitro.
1. Hot Start PCR
Ko te wa tiimata o te whakanui i roto i te PCR tikanga ehara i te whakauru i te miihini PCR ki roto i te miihini PCR, katahi ka timata te kaupapa ki te whakanui.Ka oti te whirihoranga o te punaha, ka timata te whakanui, tera pea ka nui ake te kore-motuhake, a ka taea e te PCR wera-wera te whakaoti i tenei raru.
He aha te PCR timatanga wera?I muri i te whakaritenga o te punaha tauhohenga, ka tukuna te whakahuri i te haurangi i te teitei teitei (te nuinga ake i te 90°C) i te wa o te whakamahana tuatahi o te tauhohenga, i te waahi "tmatanga wera" ranei, kia whakahohehia ai te DNA polymerase.Ko te wa whakahohenga me te pāmahana ka whakawhirinaki ki te ahua o te polymerase DNA me te whakarereke wera-tīmatanga.Ko tenei tikanga ka whakamahia te nuinga o nga whakarereke penei i nga paturopi, nga hononga hononga, te whakarereke matū ranei hei aukati i te mahi a te DNA polymerase.I te mea ka aukatihia te mahi a te DNA polymerase i te pāmahana rūma, ko te hangarau whakaoho wera he tino pai mo te whakarite i nga punaha tauhohenga PCR maha i te pāmahana rūma me te kore e patu i te motuhake o nga tauhohenga PCR.
2. RT-PCR
Ko te RT-PCR (Whakamuri Whakamuri PCR) he tikanga whakamatautau mo te whakawhiti whakamuri mai i te mRNA ki te cDNA me te whakamahi hei tauira mo te whakakaha.Ko te tikanga whakamatautau ko te tango i te RNA katoa i roto i nga kopa, i nga pūtau ranei i te tuatahi, te whakamahi i te Oligo (dT) hei kaupapa tuatahi, te whakamahi i te transcriptase whakamuri ki te whakahiato cDNA, katahi ka whakamahi cDNA hei tauira mo te whakakaha PCR kia whiwhi ai i te ira whainga, ki te kite ranei i te whakaaturanga ira.
3. Korekorero ine PCR
PCR ine kareoro (PCR ine-wa-Tuturu,RT-qPCR) e pa ana ki te tikanga o te taapiri i nga roopu kareoro ki te punaha tauhohenga PCR, ma te whakamahi i te kohinga o nga tohu kareoro ki te aro turuki i te katoa o te mahi PCR i roto i te waa tuuturu, ka mutu te whakamahi i te pihi paerewa hei tātari ine te tauira.Ko nga tikanga qPCR e whakamahia ana ko SYBR Green I me TaqMan.
4. Kohanga PCR
Ko te Nested PCR e tohu ana ki te whakamahi i nga huinga tuatahi PCR e rua mo nga wahanga e rua o te whakakaha PCR, ko te hua whakakaha o te rauna tuarua ko te kongakonga ira ira.
Ki te kore e tauritenga o te takirua tuatahi o nga papa tuatahi (o-waho) ka nui ake te hua kore-motuhake, he iti rawa te tupono o te rohe kore-motuhake e mohiotia ana e te rua o nga papa tuatahi me te whakanui haere tonu, no reira ko te Ko te whakanui i te rua o nga waahanga tuatahi, kua pai ake te motuhake o te PCR.Ko tetahi painga o te mahi i nga rauna PCR e rua ko te awhina ki te whakanui i nga hua mai i te iti o te DNA timatanga.
5. Whakatau PCR
Ko te Touchdown PCR he tikanga hei whakapai ake i te motuhake o te tauhohenga PCR ma te whakatika i nga tawhā huringa PCR.
I roto i te PCR touchdown, ka whakaritea te pāmahana whakaeneene mo nga huringa tuatahi he torutoru nga nekehanga ki runga ake i te teitei o te pāmahana whakaeneene (Tm) o nga mea tuatahi.Ka taea e te teitei ake o te pāmahana whakaeneene te whakaiti i te whakakaha kore-motuhake, engari i te wa ano, ka nui ake te pāmahana whakaeneene ka whakararu i te wehenga o nga papa tuatahi me nga raupapa whaainga, ka heke te hua PCR.Na reira, i roto i nga huringa tuatahi, ko te tikanga ka heke te pāmahana whakaeneene ki te 1°C mo ia huringa ki te whakanui ake i te ihirangi o te ira whainga i roto i te punaha.I te wa e whakahekehia ana te pāmahana o te annealing ki te pāmahana tino pai, ka mau tonu te pāmahana annealing mo nga huringa e toe ana.
6. Tika PCR
Ko te PCR tika e pa ana ki te whakakaha ake o te DNA whainga mai i te tauira me te kore e hiahiatia te wehenga waikawa karihi me te purenga.
E rua nga momo PCR tika:
tikanga tika: tango i te iti o te tauira ka tapiri tika atu ki te PCR Master Mix hei tohu PCR;
tikanga pakaru: i muri i te whakatauira i te tauira, whakauruhia ki te lysate, lyse ki te tuku i te genome, tango i te iti o te supernatant lysed ka tapiri atu ki te PCR Master Mix, mahia te tohu PCR.Ko tenei huarahi ka ngawari te rerenga mahi whakamatautau, ka whakaiti i te waa-a-ringa, me te karo i te ngaro o te DNA i nga wa e purea ana.
7. SOE PCR
Ko te whakahiato ira ma te PCR toronga inaki (SOE PCR) ka whakamahi i nga papa tuatahi me nga pito taapiri kia hangai nga hua PCR ki nga mekameka inaki, na i te tauhohenga whakakaha ka whai ake, na te toronga o nga mekameka inaki, he momo puna o A tikanga e inaki ai nga kongakonga kua whakakahangia. ka honoa tahi.I tenei wa e rua nga waahanga tono nui o tenei hangarau: te hanga ira whakakotahitanga;ira irakēhanga pae-whakahaere.
8. IPCR
Ko te PCR Inverse (IPCR) e whakamahi ana i nga matatiki taapiri whakamuri ki te whakanui i nga kongakonga DNA i tua atu i nga waahanga tuatahi e rua, me te whakanui i nga raupapa kore mohiotia ki nga taha e rua o te kongakonga DNA e mohiotia ana.
I hangaia te IPCR i te tuatahi ki te whakatau i te raupapa o nga rohe e kore e mohiotia ana e tata ana, a ka whakamahia te nuinga ki te ako i nga raupapa kaiwhakatairanga ira;nga whakarereketanga chromosomal oncogenic, penei i te whakakotahitanga ira, te whakawhiti me te whakawhiti;me te whakaurunga ira ira, ka whakamahia ano i naianei.
9. dPCR
Ko te PCR Mamati (dPCR) he tikanga mo te inenga tino o nga ngota ngota ngota waikawa karihi.
I tenei wa e toru nga tikanga mo te ine i nga ngota ngota ngota ngota karihi.Ko te Photometry i runga i te urunga o nga ngota ngota ngota waikawa karihi;Ko te PCR ine ine-wa-tuuturu (Real Time PCR) e ahu mai ana i runga i te uara Ct, a ko te uara Ct e tohu ana ki te tau hurihanga e pa ana ki te uara rewharewha ka kitea;Ko te PCR matihiko te hangarau Ine hou e pa ana ki te tikanga PCR-kotahi mo te tatau i te ine ine waikawa karihi he tikanga ine ine.
Wā tuku: Hune-13-2023