Te whakamahi me te whakatupato i te ngongo centrifuge ultrafiltration
1) Kōwhiria he ngongo ultrafiltration pai.Kia mahara he rereke nga kiriuhi UF i te taumata o te manawanui ki nga momo matū.Ko te tikanga, ko nga ngongo ultrafiltration me te 10 kDa molecular weight cut-off ka taea te whiriwhiri me te molecular weight cut-off e kore e nui ake i te 1 / 3 o te taumaha ngota o te pūmua o te paanga, penei i te 35 kDa.Mēnā kei te 10 kd te taumaha rāpoi o te pūmua e whai hua ana, ka taea te whakamahi i te ngongo ultrafiltration me te tapahanga rāpoi ngota o te 3 KD.
(2) Ko te ultrafiltration, hou i hokona, he maroke, me te wai ultrapure tāpiri i mua i te whakamahi me te wai i haere katoa i roto i te kiriuhi, tio pati pouaka ranei i mua matao mo te meneti torutoru.Ka ringihia te wai, ara, te wai pūmua, me te nui o te taapiri, ko tehea kare i nui ake i te raina ma kei runga o te ngongo.He maamaa te mahi, a me whakamatao te ngongo ultrafiltration ki te hukapapa i mua i te taapiri i te otinga pūmua.
3) Ko te papatipu me te pokapū o te taumaha kia eke ki te pauna.Kia mahara ko te tere hurihuri me te whakaterenga kaore i te tino tere, ki te kore ka pakaru tika te membrane ultrafiltration.I timatahia te ultrafiltration centrifugal (kua whakamataohia te centrifuge ki te 4 nga nekehanga).I muri i te hurihanga o te RPM o nga centrifuges rereke ki te g, he rereke.Ko te whakatere o te centrifuge i whakatikahia ki te iti rawa, ka whakaiti i te pehanga ki te membrane.Kia mahara, me waiho e koe te centrifuge i muri i te taenga o te centrifuge ki tona tere, ki te raru ranei koe, kaore e taea e koe te whakahaere mo te wa tuatahi.Ko te takotoranga o te kiriuhi ki te miro i whakaritea kia rite ki nga tohutohu (ko te take centrifuge koki he membrane ki te tuaka tika).I roto i te whakamahinga mahi, he iti ake te tere hurihanga whanui i tera i roto i nga tohutohu, kia roa ai te ora o te ngongo centrifuge.
3) Ko te papatipu me te pokapū o te taumaha kia eke ki te pauna.Kia mahara ko te tere hurihuri me te whakaterenga kaore i te tino tere, ki te kore ka pakaru tika te membrane ultrafiltration.I timatahia te ultrafiltration centrifugal (kua whakamataohia te centrifuge ki te 4 nga nekehanga).I muri i te hurihanga o te RPM o nga centrifuges rereke ki te g, he rereke.Ko te whakatere o te centrifuge i whakatikahia ki te iti rawa, ka whakaiti i te pehanga ki te membrane.Kia mahara, me waiho e koe te centrifuge i muri i te taenga o te centrifuge ki tona tere, ki te raru ranei koe, kaore e taea e koe te whakahaere mo te wa tuatahi.Ko te takotoranga o te kiriuhi ki te miro i whakaritea kia rite ki nga tohutohu (ko te take centrifuge koki he membrane ki te tuaka tika).I roto i te whakamahinga mahi, he iti ake te tere hurihanga whanui i tera i roto i nga tohutohu, kia roa ai te ora o te ngongo centrifuge.
(4) Ka aro ki te toenga 1ml, tangohia te 50ul o te wairewa parepare, tāpirihia te 10ul o te rere ka tirohia mena he tae kikorangi, hei whakatau mena kei te ngaro te pūmua o te ngongo ultrafiltration.Mena he turuturu te ngongo, ringihia ano te paparanga o runga ka rere ki roto ki te ngongo hou hei timata i te ultrafiltration.Ki te tino mohio mena kua ngaro nga ngongo, whakahiatohia mo te 10min me te 5mgml o te BSA i mua i te rere, ka rere i runga i te kāpia pūmua, i te whakahiato mawhero Bradford ranei, ka haere tonu ma te taapiri i te toenga o te otinga pūmua kukū (e mahi ana i runga i te tio me te aukati i te whakamahana o nga pūmua) tae noa ki te kua taapiri katoa te kakano.Kia tupato i te wa o te centrifugation mena ka puta te rerenga o nga pūmua, ka kati te ngongo.Mēnā ka puta te rerenga, whakatau mēnā he nui te kukū o te pūmua te take motuhake o te rerenga, he parepare tika ranei;Ko te mea o mua ka taea te whakatau ma te ultrafiltration o nga ngongo ultrafiltration maha i te wa kotahi, ka whakaheke i te kukū, me te mea whakamutunga ma te whakawhiti i nga rongoa rereke rereke tae noa ki te kore e puta te rerenga o te pūmua.
(4) Ka aro ki te toenga 1ml, tangohia te 50ul o te wairewa parepare, tāpirihia te 10ul o te rere ka tirohia mena he tae kikorangi, hei whakatau mena kei te ngaro te pūmua o te ngongo ultrafiltration.Mena he turuturu te ngongo, ringihia ano te paparanga o runga ka rere ki roto ki te ngongo hou hei timata i te filtration.Ki te tino mohio mena ka ngaro nga ngongo, ka whakahiatotia mo te 10min me te 5mgml o te BSA i mua i te rere, ka rere ki runga i te kāpia pūmua, te whakamatautau maru o Bradford ranei, ka haere tonu ma te taapiri i te toenga o te otinga pūmua (e mahi ana i runga i te tio me te aukati i nga pūmua mai i te wera) tae noa ki te kua taapiri katoa te kakano.Kia tupato i te wa o te centrifugation mena ka puta te rerenga o nga pūmua, ka kati te ngongo.Mēnā ka puta te rerenga, whakatau mēnā he nui te kukū o te pūmua te take motuhake o te rerenga, he parepare tika ranei;Ko te mea o mua ka taea te whakatau ma te ultrafiltration o nga ngongo ultrafiltration maha i te wa kotahi, ka whakaheke i te kukū, me te whakamutunga ma te whakawhiti i nga momo rongoa parepare tae noa ki te kore e puta te rerenga o te pūmua.
(5) Ko nga taahiraa tuatahi ka whakamahia hei whakakoi i te pūmua, a, ki te whakarereketia te parepare, me ata taapirihia he parapara hou (te filtration i roto i te membrane ultrafiltration 0.22um) ki te 1ml o te katoa o te pūmua, ka huri ki te 1ml mo te toru. nga wa karapīpiti, me te rōrahi whakamutunga kukū whakamutunga i runga i te kukū pūmua e hiahiatia ana, te tikanga e kore e neke atu i te 500ul, engari ano ki roto i te 200ul.Ka eke ki te 1000 × neke atu ranei i nga wa e toru, ka rite ki te nui o te huringa parepare, ka tatauhia e te 10 × neke atu ranei te whakarangatiratanga rōrahi ia wa.
(5) Ko nga taahiraa tuatahi ka whakamahia hei whakakoi i te pūmua, a, ki te whakarereketia te parepare, me ata taapirihia he parapara hou (te filtration i roto i te membrane ultrafiltration 0.22um) ki te 1ml o te katoa o te pūmua, ka huri ki te 1ml mo te toru. nga wa karapīpiti, me te rōrahi whakamutunga kukū whakamutunga i runga i te kukū pūmua e hiahiatia ana, te tikanga e kore e neke atu i te 500ul, engari ano ki roto i te 200ul.Ka eke ki te 1000 × neke atu ranei i nga wa e toru, ka rite ki te nui o te huringa parepare, ka tatauhia e te 10 × neke atu ranei te whakarangatiratanga rōrahi ia wa.
Wā tuku: Noema-09-2022